在使用抗生素期間或停用抗生素後短期內，特別是在應用林可黴素、氯林可黴素後，突然出現無紅細胞的粘液腹瀉或腹部手術後病情反而惡化，並出現腹瀉時應想到本病。通過乙狀結腸鏡檢查，假膜和糞中細胞毒素的測定陽性可以迅速診斷。
1、實驗室檢查
周圍血白細胞增多，多爲10000~20000/m3以上，甚至高達40000/m3以上，以中性粒細胞增多爲主。糞常規檢查無特異性改變，僅有白細胞，肉眼血便少見，有低白蛋白血癥，電解質失平衡或酸鹼平衡失調。糞便細菌特殊條件下培養，多數病例可發現有難辨梭狀芽孢桿菌生長，糞內細胞毒素檢測有確診價值。將患者糞的過濾液稀釋不同倍數，置於組織培養液中，觀察細胞毒的作用，1:100以上具有診斷意義，污泥梭孢菌抗毒中和試驗常陽性。
2、內鏡檢查
高度懷疑本病時，應及時進行內鏡檢查，本病往往會累及左半結腸，而直腸無病變，乙狀結腸鏡檢查是重要的診斷手段之一。病變在右半結腸時，需要用纖維結腸鏡檢查。初期未發現典型病變者需要重複內鏡肉眼觀察，初期或治療及時者內鏡無典型表現，腸粘膜正常或輕度充血、浮腫。嚴重者可見粘膜脆性增強和明顯潰瘍形成，粘膜表面覆蓋黃白色或黃綠色假膜。
3、x線檢查
腹部平片顯示腸癱或輕度腸擴張，鋇劑灌腸檢查顯示腸壁增厚，顯着浮腫，腸袋消失，部分病例顯示腸壁之間有氣體。這個徵兆是腸壁壞死的一部分，結腸細菌侵入引起的，潰瘍和息肉樣的病變表現。上述x線缺乏特異性，診斷價值少。空氣鋇劑與灌腸檢查相比，可以提高診斷價值，但有腸穿孔的危險，必須慎重使用。
