經直腸超聲引導下前列腺穿刺活檢術一般在超聲室內進行。在行此檢查之前您要停用阿司匹林、華法林等抗凝藥物至少2周（如既往曾行心臟換瓣手術者，應先給泌尿外科醫師說明，並確定停用時間或如何減量），如不停用，易出現出血。
因直腸是消化道最末端，其內有大量的革蘭氏陰性菌，在行此檢查前需行灌腸清洗您的直腸，並使用靜脈抗生素，以預防感染。做此檢查時，一般醫生讓您左側臥位，並雙腿蜷曲。一般不行任何麻醉，將一個約拇指粗的超聲探頭置入您的直腸，此時有稍微的不適，在超聲的監測下行前列腺的穿刺活檢，一般取6點、10點或13點（因醫院不同可能去活檢的針數不同），如超聲發現可以的低迴聲竈，醫生多會在此部位爲您多加幾針，以減少漏診。在穿刺時稍有疼痛，一般人都能耐受。
